Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Обучение > Ферменты.

Работа с ферментами.


Работа с ферментами должна соответствовать двум утверждениям: (i) обычно ферменты очень плохо переносят даже кратковременный нагрев до комнатной температуры, (ii) обычно они очень дороги.

  • Старайтесь работать с разумными аликвотами ферментов, а не с исходными пробирками. Стоковые пробирки храните в надёжном морозильнике. Достоинство аликвот - если с ферментом что то случится (загрязнение, инактивация), то будет потеряна лишь часть. Недостаток - перенос из одной пробирки в другую означает, что часть фермента останется на стенках типа и пробирки.
  • Фермент - обычно самый уязвимый компонент реакции, требующий для себя определённого pH и соли. Поэтому вносите его последним, когда все остальные компоненты уже добавлены и СМЕШАНЫ (!!!).
  • Используйте ровно необходимые (или только чуть большие) количества ферментов. Слишком большие количества ферментов опасно брать в реакцию, так как:
  • - все ферменты содержат примеси,
    - иногда избыток фермента не только бесполезен, но и вреден,
    - как уже говорилось, почти все ферменты дороги.

  • Очень плохой тон - измерять количество ферментов не в единицах активности, а в микролитрах.
  • Ферменты извлекаются из морозильника (в переносном морозильничке) непосредственно перед внесением и как можно быстрее убираются обратно. Если фермент находится в 0.5ml эппендорфе (а лучше использовать для ферментов именно эти пробирки), то нужно использовать 1.5ml охлаждённый эппендорф как адаптер.
  • Пробирку с ферментом держат пальцами с боков на том уровне, на котором раствора фермента нет.
  • Очень важно !!! Перед тем как открыть пробирку нужно сбросить её содержимое на дно кратковременным (~2-5'') центрифугированием. Этого можно не делать лишь в том случае, если вы постоянно пользуетесь этой пробиркой и уверены в том, что её никто не переворачивал "с прошлого раза".

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100