Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Обучение > Автоматическая пипетка.

Работа с автоматической пипеткой.

Автоматическая пипетка – основной инструмент при работе в лаборатории (кстати, и цена у пипетки совсем не маленькая). Её нужно беречь, лелеять и холить.

Введение.

  • Априори, объем, выставленный на пипетке, равен объему жидкости в типе, только в том случае, если эта жидкость - вода при комнатной температуре. "Особое внимание" (контролировать объем в типе визуально) требуется обращать при отборе:
    1. вязких жидкостей типа глицерина (практически всегда в таких случаях лучше пользоваться весами);
    2. жидкостей с низким поверхностным натяжением, особенно при повторных заборах (детергенты, растворы белков);
    3. холодных и горячих растворов, так как воздух в типе меняет температуру, и, следовательно, объём (растворы ферментов на -20oС, горячие буфера для гибридизации, верхний агар).
  • Автоматические пипетки используют либо совсем неградуированные, либо слабо градуированные типы. С заметной частотой случается, что отбирается неправильный объём (некачественный тип, тип неплотно одет, тип не сразу коснулся жидкости, тип закупорился каким-нибудь сгустком). Поэтому нужно контролировать работу пипетки "на глаз". Речь не идёт о том, чтобы различать 950µl и 990µl, но разницу в 25-30% нужно уметь заметить (не говоря уже о том, что случается, что начинающие путают 200µl и 20µl пипетки).
  • Типчик в пробирке
  • Типчик имеет не только внутренний объем, но и поверхность:
    1. не надо глубоко погружать тип в отбираемую жидкость (особенно в случае вязких жидкостей);
    2. следует обращать внимание, чтобы тип не касался ничего лишнего своей внешней поверхностью.
  • Априори, материал пипетки выдерживает только пары воды. В остальных случаях устойчивость не гарантируется. Особое внимание следует обращать на летучие жидкости. Лучше вообще не использовать автоматическую пипетку при работе с органическими растворителями и кислотами.

    Правила работы.

  1. перед отбором сбросить жидкость на дно эппендорфа (ЦФ). Боковыми стенками типа не касаться боковых стенок пробирки*;
  2. отжать пипетку до первого упора;
  3. жидкость отбирать прямо с поверхности, тип глубоко не опускать;
  4. выдавливать жидкость, отжав пипетку до второго упора (по возможности на стенку пробирки или на поверхность жидкости – лучше не капать и не погружать тип глубоко).

    Для того, чтобы жидкость не попала внутрь автоматической пипетки

    1. отжимать поршень вверх обязательно плавно;
    2. не класть на стол пипетку с надетым типчиком **;
    3. не сбрасывать типчик, в котором есть жидкость.

    ____________________
    * сразу по двум причинам: (i) часто тип укрепляют на пипетке руками, так что внешняя поверхность у него грязная; (ii) на внешнюю поверхность может налипнуть жидкость со стенок пробирки.
    ** тоже по двум причинам: (i) типчик может загрязниться/кого-нибудь испачкать (особое внимание при "чистой" работе (стерильные среды, RNA, PCR) или работе с "опасными" растворами (бактериальные суспензии, радиоактивность, бромистый этидий); если в типе осталась жидкость, то она может затечь внутрь пипетки (если осталось больше 50µl в желтом типе или больше 200µl в синем). НО!!! Растворы с низким поверхностным натяжением (растворы белков, детергентов, фенол, хлороформ, спирт) способны затечь в горизонтально лежащую пипетку даже если их в типчике очень мало.

    Чистка пипетки.

    Если в пипетку всё же попала жидкость, её нужно разобрать и почистить. В первый раз нужно попросить опытного сотрудника, чтобы он показал как это делается (и внимательно смотреть самому, чтобы научиться). Точность пипеток проверяется на электронных весах. В качестве жидкости используется mQ (или дистиллят).

  1. разобрать пипетку*;
  2. промыть её (но не наборный механизм) раствором детергента**;
  3. сполоснуть mQ;
  4. протереть фильтровалкой;
  5. подсушить в термостате 37-42oС, ~1-2h;
  6. смазать хорошей вакуумной смазкой;
  7. вновь собрать.
  8. ____________________
    * очень внимательно отнеситесь к маленькому уплотнительному колечку и подложке для него (чтобы они не потерялись);
    ** если внутри грязь пристала плотно, то для чистки можно использовать толстую нитку с привязанным к ней кусочком марли.


"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100