Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Растворы > Многокомпонентные растворы.

Многокомпонентные растворы.

 

 
 
 
 
 
 
 
    Инструкция по работе с прописями растворов откроется в новом окне при нажатии на эту кнопку:

    TE

    1x; pH7.4; 7.6; 8.0; (хранить при 4oС).

    Конц.Сток1ml5ml10ml50ml400ml
    Tris Cl10mM1M10µl50µl100µl500µl4ml
    EDTA1mM0.5M2µl10µl20µl100µl800µl
    H2O mQ988µl4.94ml9.88ml49.4ml395ml

    10x:

    Конц.Сток1ml5ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5M20µl0.1ml
    H2OmQ 880µl4.4ml
  • Стерилизовать автоклавированием.
  • STE

    1x; (хранить при 4oС).

    Конц.Сток1ml5ml10ml50ml
    NaCl0.1M5M20µl100µl200µl1.0ml
    Tris Cl, pH8.010mM1M10µl50µl100µl0.5ml
    EDTA, pH8.01mM0.5M2µl10µl20µl100µl
    H2O mQ0.968ml4.84ml9.68ml48.4ml

    10x:

    Конц.Сток1ml5ml
    NaCl1.0M5M0.2ml1.0ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5mM20µl0.1ml
    H2OmQ 680µl3.4ml
  • Стерилизовать автоклавированием.
  • SSC

    20x; pH 7.0; (хранить при NT).

    Конц.Сток0.5L1.5L2L
    NaCl3M58.44g/M87.66g263.0g350.6g
    Na3C6H5O7x 5.5H2O0.3M357.1g/M53.57g160.7g214.3g
    H2O mQ440.3ml1.32L1.76L

    p =1.103

    TAE

    1x pH=7.6:

    Tris-acetate 40mM
    EDTA 1mM

    (хранить основной сток при 4oС, рабочее количество (~100ml) при NT)

    Конц.Сток100ml150ml200ml250ml
    Tris-base2M121.1g/M24.22g36.33g48.44g60.55g
    EDTA0.05M372.3g/M1.862g2.792g3.723g4.654g
    Укс. к-та~1.56M17.4M ~8.96ml
    ~9.40g
    ~13.44ml
    ~14.10g
    ~17.92ml
    ~18.80g
    ~22.40ml
    ~23.50g
    ~
    ~
    H2O mQ~73.30g~109.95g~146.60g~183.25g~

    p(50x)=1.0878

  • Удобно вначале растворить Tris и EDTA и лишь затем добавлять кислоту, следя за pH.
  • TBE

    10x, pH ~8.3;(хранить при NT в чистой посуде)

    1x10xСток1L
    Tris base89mM0.89M121.14g/M107.8g
    Boric acid89mM0.89M61.83g/M55.03g
    EDTA, pH 8.02mM20mM500mM40ml
    43.84g

    H2O  mQ863.3ml
  • 10х сток вполне устойчиво хранится при NT, если его профильтровать через 0.4µm фильтр.
  • Для PAAG используется как 1х, для агарозных - как 0.5х.
  • Для агарозных гелей имеет смысл применять при работе с маленькими (< 200bp) фрагментами. Считается, что клонирование из ТВЕ гелей сложнее, чем из ТАЕ.
  • FGRB

    50x (formaldehyde gel-running buffer), p=1.104g/ml (хранить при +4oС):

    Конц.Сток0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONax3H2O0.5M136.08g/M34.02g68.04g136.08g
    EDTAx2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ404.0ml808ml1616ml
    Конц.Сток0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONa anhydrous0.5M82.04g/M20.51g41.02g82.04g
    EDTA x 2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ417.5ml835ml1670ml
  • Довести до pH7.0 10N NaOH (на 500ml буфера ~22ml), фильтровать через 0.22µm фильтр.
  • На свету (в процессе хранения) желтеет, но это не сказывается на его качестве.
  • GTGB

    20x /Glycerol tolerant gel buffer/ (хранить при +4oС):

    Конц.Сток1L1.5L2.0L2.5L

    Tris base

    1.78M121.14g/M216g324g432g540g

    Taurine

    0.56M125.15g/M72g108g144g180g

    Na2EDTAx2H2O

    10.7mM372.3 g/M4g6g8g10g

    H2O

     mQ802ml1203ml1604ml2005ml

    p=1.094

  • Taurine: C2H7NO3S; Mw=125.15g/M.
  • TGB

    Tris-Glycine buffer 5x, pH8.3, (хранить основной сток при +4oС, рабочий сток - при NT).

    1xКонц.Сток1L1.5L
    Tris-base25mM125mM121.1g/M15.1g22.71g
    Glycine250mM1.25M75.05g/M94g141g
    SDS0.1%0.5%10%50ml75ml
    H2O  mQ   

    Буфер для внесения

    10х, (хранить при NT).

    Конц.Сток1ml5ml10ml25ml
    ксилен-цианол0.1%тв.1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    бромф. синий0.1%тв.1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    SDS0.5%10%50µl250µl500µl1.25ml
    EDTA, pH8.00.1M0.5M0.2ml1.0ml2.0ml5.0ml
    глицерол50%100% 0.5ml
    0.625g
    2.5ml
    3.125g
    5.0ml
    6.25g
    12.5ml
    15.63g

    H2O mQ0.25ml1.25ml2.5ml6.25ml

    PEG-NaCl

    (хранить при 4oC).

    Конц.Сток50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M58.44g/M4.675g9.35g14.03g18.70g
    PEG-600013%тв.6.50g13.00g19.50g26.00g

    или:

    Конц.Сток50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M5M 16ml
    18.97g
    32ml
    37.95g
    48ml
    56.92g
    64ml
    75.90g

    PEG-600013%40%16.25ml32.50ml48.75ml65.00ml

    SM

    (хранить при 4oC).

    Конц.Сток10ml50ml100ml150ml
    NaCl0.1M5M200µl1.0ml2.0ml3.0ml
    MgSO4*10mM1M100µl0.5ml1.0ml1.5ml
    Tris Cl, pH7.550mM1M0.5ml2.5ml5.0ml7.5ml
    желатин0.01%2%50µl0.25ml0.5ml0.75ml
    H2O mQ9.15ml45.75ml91.5ml137.25ml

    * - добавлять после автоклавирования,

  • Стерилизовать автоклавированием.
  • STM

    (хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml
    NaCl10mM5M100µl
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ46.9ml

    TM

    (хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ47.0ml

    Денатурирующий буфер

    (хранить при NT).

    Конц.Сток100ml150ml300ml500ml750ml
    NaCl1.5M58.44g/M8.766g13.15g26.30g43.83g65.75g
    NaOH0.5M10M 5ml
    6.65g
    7.5ml
    9.97g
    15ml
    19.94g
    25ml
    33.23g
    37.5ml
    49.84g

      40g/M2g3g6g10g15g

    Нейтрализующий буфер

    (хранить при NT).

    Конц.Сток150ml300ml500ml750ml
    Tris Cl, pH7.41M121.1g/M18.15g36.3g60.5g90.75g
    NaCl1.5M58.44g/M13.15g26.30g43.83g65.75g
    HCl~0.81M11.6M/L~10.5ml~21ml~35ml~52.5ml
    EDTA (optional)1mM0.5M0.3ml0.6ml1ml1.5ml

    Проявитель Рентген 2

    (хранить при NT в темноте).

    500ml800ml1l
    метол1.1g1.76g2.2g
    Na2SO3б/в36.0g57.6g72.0g
    гидрохинон4.4g7.04g8.8g
    сода б/в24.0g38.4g48.0g
    KBr2.0g3.2g4.0g
    H2O490ml784ml980ml

    растворять в указанном порядке, p=1.115.

    Фиксаж БКФ 2

    (хранить при NT).

    500ml800ml1l
    Na2S2O3x 5H2O130g208g260g
    NH4Cl25g40g50g
    Na серноватисто-кислый пиро.8.5g13.6g17g
    H2O398ml636.8ml796ml

    растворять в указанном порядке, p=1.123.

    Сцинцилляционный раствор

    (хранить в темноте при NT):

    0.5L1L
    PPO2.50g5.00g
    POPOP0.05g0.10g
    Толуол   

    I плазмидный раствор

    (хранить при +4oС)

    Конц.Сток50ml100ml150ml200ml
    Глюкоза50mM2M 1.25ml
    1.41g
    2.5ml
    2.825g
    3.75ml
    4.24g
    5.0ml
    5.56g

    Tris Cl, pH 8.025mM1.0 M1.25ml2.5ml3.75ml5.0ml
    EDTA10mM0.5 M1.0ml2.0ml3.0ml4.0ml
    H2O mQ46.5ml93ml139.5ml186ml

    II плазмидный раствор

    Конц.Сток0.5ml1ml2.5ml5.0ml6.5ml8.5ml11ml
    NaOH0.2N1N0.1ml0.2ml0.5ml1.0ml1.3ml1.7ml2.2ml
    SDS1%10%0.05ml0.1ml0.25ml0.5ml0.65ml0.85ml1.1ml
    H2O mQ0.350ml0.7ml1.75ml3.5ml4.55ml5. 95ml7.7ml

    Смесь для окрашивания олигонуклеотидных гелей

    (хранить при NT).

    Конц.Сток100ml200ml300ml500ml
    AcONa(5.2)0.5M3M17ml33ml50.0ml83ml
    Met. blue0.04%0.2%20ml40ml60ml100ml
    H2O mQ73ml127ml190ml317ml

    Mg2+2M

    (хранить при NT).

    Конц.Сток200ml
    MgCl2x6H2O1M203.3g/M40.66g
    MgSO4x7H2O1M246.48g/M49.30g
    H2O mQ144.6g

    p=1.173g/ml.

    Деионизация формамида (мочевины, акриламида, глиоксаля).

    1. приготовить AG 501-X8 (из расчета 5g на 100ml (но для глиоксаля 1:1 w/w));
    2. сполоснуть смолу ~1ml/1g, выбросить раствор;
    3. смешивать ~1 час, без света завернув в алюминиевую фольгу;
    4. фильтровать (через фильтровальную бумагу);
    5. хранить при -20oС в банке тёмного стекла или завернув в фольгу.
  • При деионизации формамида смола меняет цвет с голубого на золотистый вне зависимости от насыщения ионообменника.
  • HSB (f+)

    high SDS hybridization buffer(хранить основной сток при 4oС, рабочий - NT)

    Конц.Сток500ml
    SDS7%тв.35g
    Formamid50%100%250ml
    283.3g

    SSC5x20x125ml
    145.3g

    Bloc. Reagent2%тв.10g
    NaP (pH 7.0)50mM1M25ml
    27.6g

    N-Lauroylsarcosine Na0.1%10%5ml
    5.1g

    Salm.Sperm DNA50µg/ml10µg/µl2.5ml
    H2O mQ49ml

    p=1.111

  • вместо 2% Blocking Reagent ("Roche Diagnostics GmBH; бывший Boehringer Mannheim"
    #1 096 176) можно использовать 10x Denhardt или сухое обезжиренное молоко.
  • Blocking Reagent можно растворить, лишь в буфере с высокой ионной силой (в данном случае - в H2O+SSC+NaP).
  • Salmon sperm DNA должна быть раздробленной и денатурированной.
  • Рестрикционные буфера 10x

    А.

    Конц.Сток100µl1ml
    Tris Ac (pH7.9 37oC)33mM1M33µl330µl
    MgAc10mM1M10µl100µl
    KAc66mM5M13.2µl132µl
    DTT0.5mM1M0.5µl5µl
    H2O mQ43.3µl433µl

    B.

    Конц.Сток100µl1ml
    Tris Cl (pH 8.0 37oC))10mM1M10µl100µl
    MgCl25mM1M5µl50µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    b-Me1mM1M1µl10µl
    H2O mQ64µl640µl

    L.

    Конц.Сток100µl1ml
    Tris Cl (pH 7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ79µl790µl

    M.

    Конц.Сток100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    NaCl50mM5M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ69µl690µl

    H.

    Конц.Сток100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)50mM1M50µl50µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H20 mQ19µl190µl

    Раствор Денхарда 50х

    (хранить при -20oС)

    Конц.Сток50ml300ml1L
    Ficoll 4001%(w/v)тв.0.5g3.0g10g
    Polyvinilpyrolidone1%(w/v)тв.0.5g3.0g10g
    BSA (fr V)1%(w/v)тв.0.5g3.0g10g
    H2O mQ46.7ml292.2ml974ml

    p=1.004

  • фильтровать;
  • можно готовить как 100х.
  • PBS (рецепт 1)

    pH(1x)=7.4, (хранить при NT или при 4oС):

    1xКонц.Сток100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO45.2mM52mM142g/M0.738g3.692g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    
    1xКонц.Сток100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO4x7H2O5.2mM52mM268.1g/M1.394g6.971g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    

    PBS (рецепт 2) 10x

    pH(1x)=7.3, (хранить при NT или при 4оС)
    1x10xСток100ml500ml
    KH2PO41.47mM14.7mM136.1g/M0.2g1.0g
    Na2HPO4x7H2O4.29mM42.9mM268.1g/M1.15g5.75g
    NaCl137mM1.37M58.44g/M8.0g40.0g
    KCl2.68mM26.8mM74.56g/M0.2g1.0g
    H2O  mQ   

    PBS (рецепт 3) 10x

    pH(1x)=7.3, (хранить при NT или при 4оС)
    1x10xСток100ml500ml
    KH2PO42mM20mM136.1g/M0.272g1.36g
    Na2HPO4x7H2O10mM100mM268.1g/M2.68g13.41g
    NaCl137mM1.37M58.44g/M8.0g40.0g
    KCl2.7mM27mM74.56g/M0.20g1.01g
    H2O  mQ   
  • стерилизовать автоклавированием;
  • pH зависит от концентрации, поэтому измерять лишь разбавив до 1х.
  • pH 10x должен быть ~6.8 (если необходимо, можно довести NaOH). Стерилизовать автоклавированием. После разбавления pH должен стать 7.4.
  • SSPE

    pH 7.4

    Конц.Сток1L
    NaCl3M58.44g/M175g
    NaH2PO4xH2O200mM137.99g/M27.6g
    EDTA20mM372.24g/M7.4g
  • Доводить pH 10N NaOH.
  • RNase A (DNase free)

    (хранить при -20oС, рабочую аликвоту можно при 4oС)

    1. растворить 10mg/ml в 1-50mM AcONa (pH4.5);
    2. кипятить 15', дать медленно остыть до комнатной температуры;
    3. хранить рабочий (маленький, ~50 µl) сток при +4oС, основное количество - в аликвотах по ~0.5ml на -20oС.

    Буфер для хранения RNAse

    (хранить при -20oC).

    Конц.Сток1ml5ml10ml
    Tris Cl, pH7.610mM1M10µl50µl100µl
    глицерин50%100% 0.5ml
    0.630g
    2.5ml
    3.152g
    5.0ml
    6.305g

    H2O mQ0.486g2.43g4.86g

    Proteinase K

    (хранить при +4oС, долговременное хранение при –20oС):
    20mg/ml раствор в 10mM Tris Cl, 1.0mM CaCl2, 30% glycerol.

    EDTA/glycogen

    20х (хранить при -20oС):

    Конц.Сток1.0ml
    EDTA0.2M0.5M400 µl
    glycogen1mg/ml20mg/ml50 µl
    H2O mQ550 µl

    Буфер для DNase RQ1

    10x (хранить при -20oС):

    Конц.Сток1ml
    Tris Cl (pH8.025oC)0.4M1M400µl
    NaCl0.1M5M20µl
    MgCl260mM1M60µl
    CaCl20.1M1M100µl
    H20 mQ420µl

    Буфер для хранения DNAse

    (хранить при -20oC).

    Конц.Сток1ml1.5ml2.5ml5ml10ml
    Tris Cl, pH 7.020mM1M20µl30µl50µl100µl200µl
    NaCl50mM5M10µl15µl25µl50µl100µl
    DTT1mM1M1µl1.5µl2.5µl5.0µl10µl
    глицерин50%100% 0.5ml
    0.630g
    0.75ml
    0.9g
    1.25ml
    1.58g
    2.5ml
    3.15g
    5.0ml
    6.31g

    H2O mQ0.485g0.73g1.21g2.42g4.85g

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100