Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Растворы > Бактериальные среды.

Среды и добавки.


 
 
    Инструкция по работе с прописями растворов откроется в новом окне при нажатии на эту кнопку:


    Среды.

    LB, LTB

    pH 7.0; p=1.024

     Сток100ml150ml200ml300ml600ml750ml
    1.Бакто-триптонтв.1g1.5g2.0g3.0g6.0g7.5g
    2.Бакто-дрож. экст.тв.0.5g0.75g1.0g1.5g3.0g3.75g
    3.NaClтв.1.0g1.5g2.0g3.0g6.0g7.5g
    4.H2OmQ95.3g143g190.7g286g572g715g
    5.агар верх.тв.0.65g0.98g1.3g1.95g3.90g4.88g
    6.агар ниж.тв.1.5g2.3g3.0g4.5g9.0g11.3g
    7.NaOH10N16.7µl25µl33.4µl50µl100µl125µl
    8.MgSO41M1ml1.5ml2.0ml3.0ml6.0ml7.5ml

    LTB: п.1, 3, 4, 7, 8.
    LB: п.1, 2, 3, 4, 7.
    LB/Mg: п.1, 2, 3, 4, 7, 8.

  • Агар (как верхний, так и нижний) нужно смешать сразу после автоклавирования, иначе он застынет как неоднородная субстанция: внизу существенно более концентрированный, чем вверху.
  • LB (low salt)

    для работы с Zeocine pH 7.0

    Сток100ml150ml200ml300ml600ml750ml
    Бакто-триптонтв.1g1.5g2.0g3.0g6.0g7.5g
    Бакто-дрож. экст.тв.0.5g0.75g1.0g1.5g3.,0g3.75g
    NaClтв.0.5g0.75g1.0g1.5g3.,0g3.75g
    H2OmQ95.3g143g190.7g286g572g715g
    NaOH10N16.7µl25µl33.4µl50µl100µl125µl

    M9

    10х

    Конц.Сток50ml75ml100ml
    Na2HPO4x 12 H2O48mM358.14g/M8.60g12.90g17.19g
    KH2PO422mM136.09g/M1.50g2.25g3.00g
    NaCl8.5mM58.44g/M0.25g0.38g0.50g
    NH4Cl18.7mM53/49g/M0.50g0.75g1.00g

    Среда М9:

    Конц.Сток100ml150ml200ml
    M91x10x10ml15ml20ml
    Глюкоза0.4%10%4ml6ml8ml
    H2O стер.86ml129ml172ml

    + добавки:

    тиамин1mM1M100µl150µl200µl
    MgSO41mM1M100µl150µl200µl
    CaCl20.1mM1M10µl15µl20µl
  • Для заливки чашек добавить агар до 3%.
  • NZY

    1 L200ml
    NZ aмин10g2g
    NaCl5g1g
    Бакто-дрож. экст.5g1g
    MgSO4xH2O2g0.4g
    H2O950ml190ml

    SOC, SOB

    (хранить при NT).

    Сток200ml400ml
    Бакто-триптон 4.0g8.0g
    Бакто-дрож. экст. 1.1g2.2g
    NaCl5M0.4ml0.8ml
    KCl1M2.0ml4ml
    H2O ~196ml~391ml
    1. автоклавировать, охладить до <60oС;
    2. добавить
    3. 0.01V 2M Mg2+{= 1M MgCl2 + 1M MgSO4}  
      0.01V 2M glucose;  

    4. фильтровать через 0.2µm фильтр;
    5. аликвотить, хранить при -20oC, (-70oC).

    SOB получается, если не добавлять глюкозу.

    Terrific Broth

    pH 7.0

    100ml150ml200ml300ml667ml
    Бакто-триптон1.2g1.8g2.4g3.6g8.0g
    Бакто-дрож. экст.2.4g3.6g4.8g7.2g16.0g
    Глицерол0.4ml
    0.504g
    0.6ml
    0.757g
    0.8ml
    1.009g
    1.2ml
    1.513g
    2.667ml
    3.362g

    H2O до V90ml135ml180ml270ml600ml
    автоклавировать, затем добавить
    KPO4, pH7.0 1.0M10ml15ml20ml30ml66.7ml

    YENB

    pH 7.5: (безсолевая среда для приготовления электрокомпетентных клеток).

    Конц.Сток0.45 L0.5 L0.9 L1.0 L
    Бакто-дрож. экст.0.75%тв.3.4g3.75g6.75g7.5g
    Nutrient Broth0.8%тв.3.6g4.0g7.2g8.0g
    NaOH 10N~243 µl~270 µl~490 µl~540 µl

    2 YT

    %(w/w)200ml1L
    Бакто-триптон1.63.2g16g
    Бакто-дрож. экст.1.02g10g
    NaCl0.51g5g
    H2O96.9193.8ml969ml

    Добавки.

    IPTG

    С6H18O5S; Mw=238.3g/M;

    Конц.1ml5ml10ml
    IPTG200mg/ml0.2mg1.0g2.0g
  • Стерилизовать фильтрованием.
  • Хранить 4oC (сухой),-20oС (раствор в H2O);
  • - для плазмид - на чашку ~4µl,
    - для М13 - на 3 ml верхнего агара ~1-4µl.

    X-Gal

    C14H15BrClNO6 Mw= 408g/M;

    Конц.1ml5ml10ml
    X-Gal20mg/ml (2%)20mg0.1g0.2g
  • Хранить 4oС в темноте (сухой); -20oС в темноте (раствор в DMFA (либо DMSO c эквивалентным результатом)).
  • - для плазмид - на чашку 40µl,
    - для М13 - на 3ml верхнего агара 40µl.

    Глюкоза

    С6H12O6 Mw=180.16;

    Конц.Сток5ml10ml50ml100ml150ml200ml
    C6H12O61M180g/M0.90g1.80g9.01g18.02g27.03g36.03g
  • Стерилизовать фильтрованием.
  • Мальтоза

    100х раствор для бактериофага лямбда;

    Конц.Сток10ml50ml100ml
    мальтоза20%тв.2g10g20g
  • Стерилизовать фильтрованием.
  • Thiamine

    Vitamin B1 Aneurine; C12H17ClN4OSxHCl; Mw=337.3g/M;

    Конц.Сток1ml5ml10ml25ml
    C12H17ClN4OSxHCl1M337.3g/M0.337g1.69g3.37g8.43g
  • Стерилизовать фильтрованием.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100