Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Работа с D. melanogaster > Сбор больших количеств эмбрионов.

Сбор эмбрионов D.melanogaster.

 
Павел Марданов;
Дарья Копытова
Институт Биологии Гена;
группа экспрессии генов.

    Перед началом сбора необходимо

    1. приготовить большую популяцию мух;
    2. приготовить контейнеры для мух;
    3. залить чашки с подложками, на которые будут наноситься дрожжи;
    4. пересадить мух в контейнеры.

    Приготовление контейнеров.

    Контейнеры представляют из себя пластиковые цилиндры объёмом 10-15 литров с одним или двумя рукавами из капрона, через которые можно менять чашки, выпуская наружу лишь небольшое количество мух.

    Мы используем 10 литровые цилиндры с одним капроновым рукавом длиной 120cm.

    Приготовление чашек с подложками для сбора эмбрионов.

    Приготовление агаровых подложек:

    1. вскипятить 1620ml воды;
    2. добавить 50 грамм сахара;
    3. добавить 70g агара, избегая образования комков;
    4. добавить 473ml яблочного сока;
    5. вскипятить;
    6. остудить до 80-90°С;
    7. разлить по чашкам.


    Комментарии.

  • Данного количества хватает на заливку 40-45 чашек диаметром 150mm.
  • Вместо яблочного сока мы используем пиво "Очаковское оригинальное". Эффект от него не хуже, чем от яблочного сока, а по цене в два раза дешевле.
  • Чашки с подложками хранятся на +4oС. Их можно использовать несколько раз. Главное - не давать им пересохнуть.
  • Подложки используются с двумя целями: привлекают мух запахом и не дают высохнуть дрожжевой суспензии, которую на них наносят.
  • Мы собирали 12 часовых эмбрионов: в 9:00 и в 21:00. В один 10 литровый цилиндр мы сажаем по 13-15g мух. Чашки с подложками мажем дрожжевой суспензией (100g дрожжей + 30ml сока или пива). Мухи гибнут на сильно влажных дрожжах, но не могут есть сухие. Нужно что-то среднее. В один цилиндр помещаем за раз две чашки, на которых в сумме находится 25g дрожжей. Дрожжи необходимо наносить на чашки равномерно, т.к. мухи откладывают эмбрионы только на них. Чашки заменяются новыми каждые 12 часов в течение трёх суток. Чашки c уже собранными эмбрионами хранятся в это время на +4oС в условиях, когда эмбрионам трудно пересохнуть, но они могут дышать.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100