Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Экспрессионный анализ > Подготовка фильтров к гибридизации.

Обработка фильтров перед первой гибридизацией.


Предварительное "отшпаривание" проводится для того, чтобы DNA с фильтра не смывалась в гибридизационный раствор во время гибридизации (смытая DNA может конкурировать с фильтром за связывание метки).

  1. подписать фильтры (название мембраны, поле, лот) несмываемыми чернилами (Faber-Castell TG1, #16 33 99), разрезать;
  2. 2 х 10' отмывка NT :
  3. Конц.Сток1L
    SSC1x20x50ml
    SDS0.1%10%10ml
    H2O mQ940ml
  4. 3 x 20', 80oC:
  5. Конц.Сток1L
    SSC0.1x20x5ml
    SDS0.1%10%10ml
    H2O mQ985ml
  6. 1 x 20' 80oC (налить 95oC) в том же растворе;
  7. подсушить на 3ММ;
  8. хранить между листами Whatman 3MM при NT или –20oС.



"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100