Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Экспрессионный анализ > Меченье тотальной РНК.

Мечение total RNA с oligo(dT) праймера.

Состав растворов, очистка от РНК и гибридизация - как описано в протоколе "Random primer на polyA+RNA".

  1. в пробирку:
  2. oligo(dT) primer ( 100µM) - 0.5µl
    total RNA - 10µg
    H2O - до 15µl;

  3. 70oC, 3';
  4. 0oC, 2';
  5. добавить:
  6. 5x FSB (first strand buffer) - 8µl
    0.1M DTT - 4µl
    A-mix, 20x - 1µl
    RNase Block - 0.5µl
    a[33P]dATP (10µCi/µl) - 10µl

  7. NT, 1' ( за это время премешать реакцию, сбросить на центрифуге);
  8. добавить SuperScript RT (200u/µl) /BRL/ - 2µl;
  9. 42oC, 1h;
  10. 0oC, определить процент включения по преципитации 10% ТХУ.

  11.  

Rambler's Top100