Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Иммуногистохимия и in situ > Обработка предметных и покровных стёкол.

Обработка стекол для микроскопии.


Обработка предметных стекол TESPA.

  1. промыть стекла 70% EtOH;
  2. промыть 20'' в 1N HCl;
  3. 2х промыть H2O;
  4. промыть 96% EtOH;
  5. высушить 150oС, 1-2h;
  6. 10'' в {2% TESPA в ацетоне};
  7. 2х 10'' в ацетоне;
  8. 4х промыть H2O;
  9. сушить 42oС, ~2h;
  10. хранить при NT завернутыми в фольге (~месяц).
  11. Обработка предметных стекол poly-L-lysine.

  12. замочить стекла в HCl (конц.), ON;
  13. сполоснуть 15х H2O;
  14. высушить в сушильном шкафу, накрыв фольгой: ~170oС, ~1h;
  15. опустить стекла в 1x раствор poly-L-lysine на 5';
  16. 5-10х сполоснуть H2O
  17. сушить на воздухе в термостате 60oС 1h или NT – ON
  18. хранить при комнатной температуре завернутыми в фольге (~месяц).
  19. Обработка и хранение покровных стекол.

  20. 3х обмакнуть стекло в ацетон (50ml стакан);
  21. промакнуть на фильтровалке;
  22. 3х обмакнуть стекло в EtOH 96% (50ml стакан);
  23. перенести на хранение в бюкс (~30ml) с EtOH 96%;
  24. перед использованием (работать под тягой).

  25. прополоскать (3х обмакнуть) в двух сменах EtOH 96% (два 50 ml стакана);
  26. промокнуть на фильтровалке;
  27. сушить NT 10';
  28. опустить на 2' в "Repel-silane"*;
  29. сушить NT 10';
  30. полоскать в большом объеме H2O.
  31. промокнуть на фильтровалке;
  32. сушить NT 10';
  33. хранить в 96% EtOH.

    Растворы.

    10x стоковый раствор poly-L-lysine

    poly-L-lysine 0.1% w/v в H2O (Sigma #P 8920)



    Комментарии.

    Общие.

    * Все промывки проводятся в 100 ml стеклоприёмнике.
    * Для гибридизации с mRNA использовать TESPA – обработку.

    По пунктам.

    п. 1.

  • (3-Aminopropyl)-triethoxysilan H2N(CH2)3Si(OC2H5)3- Aldrich, #11,339-5.
  • п. 14.

  • Разведенный раствор хранится < 3хмесяцев при 4oС. В 100 ml можно обработать ~90 стекол.
  • п. 25.

  • 2%(w/v) solution Dimethyl dichlorosilane in 1,1,1 - trichloroethane.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100