Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Работа с белками > Осаждение белков ТХУ.

Осаждение белков трихлоруксусной кислотой.

Дмитрий Жарков
Department of Pharmacological Sciences, State University of New York at Stony Brook, (631) 444 3585.

    Способ 1 (минимальная концентрация белка 5µg/ml).

  1. к раствору белка добавить 1/10 объёма 100% ТХУ;
  2. инкубировать 30' на льду или 15' при -20oC;
  3. Способ 2 (минимальная концентрация белка <1µg/ml и немного быстрее в исполнении).

  4. к раствору белка добавить 1/10 объёма 0.15% дезоксихолата натрия;
  5. выдержать 10' при NT;
  6. добавить 1/20 первоначального объема 100% ТХУ;
  7. Продолжение общее для обоих способов.

  8. ЦФ 5' в эппендорфовской центрифуге на максимальной скорости;
  9. отсосать супернатант пипеткой;
  10. далее можно:

    (a) растворить в 50-100µl 0.1 N NaOH;
    (b) промыть 1ml смеси этанол-эфир 1:1 (можно несколько раз, если надо хорошо удалить кислоту), после центрифугирования осадок подсушить и растворить в нужном буфере.

    Растворы.

    ТХУ

    Трихлоруксусная кислота,CCl3CO2H Mw=163.39,(хранить при NT, в темноте, под тягой).

    Конц.%(w/w)5ml10ml25ml50ml
    TХУ100% (w/v)68.785.0g10.0g25.0g50.0g
    H2OmQ31.222.27ml4.54ml11.35ml22.7ml

    0.15% дезоксихолат натрия

    (хранить при NT):

    Конц.Сток1ml50ml

    Deoxycholate

    0.15%тв.1.5mg75mg

    H2O

     mQ1ml50ml


    Комментарии.

    Общие.

  • Метод полезен, когда концентрация белка в растворе слишком мала для анализа, или объем слишком велик, чтобы нанести нужное количество белка на гель. Источник: Bollag, D.M., Edelstein, S.J. (1991). Protein Methods. Wiley-Liss, Inc., New York, p.72-3.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100