Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Работа с белками > Окрашивание гелей Imidazole/Zn.

Окрашивание белковых SDS PAAG с помощью Imidazole/Zn.

Очень быстрый, удобный и чувствительный метод. Единственный недостаток метода - гель невозможно высушить, его приходится фотографировать на темном фоне, освещая сверху.

    Окрашивание.

  1. сполоснуть в mQ 5'';
  2. уравновесить гель 0.2M Imidazole:
  3. % АА 10% 12.5% 15%
    время 5' 5-10' 15-30'
  4. окрасить покачивая ~1' в 0.3М ZnCl2
  5. сполоснуть в H2O;
  6. наблюдать на темном фоне, освещение сверху;
  7. хранить в H2O.
  8. Непроверенная информация Отмывка: (перед электроблотом).

  9. 2-3 раза (до прозрачности) по 10' в 2% лимонной кислоте;
  10. уравновесить30-60' в растворе для электропереноса:
  11. Tris Cl, pH8.3 50mM
    SDS <40kDa0.02%
    >40kDa0.1%
  12. фильтровальная бумага - тот же буфер без SDS;
  13. перенос: 2mA/cm2, 60' (или 3mA на индивидуальную полосу).

    Растворы.

    Imidazole

    2M(хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml100ml
    Imidazole2M68.1g/M6.81g13.62g
    H2O     

    ZnCl2

    3M (хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml100ml
    ZnCl23M136.28g/M20.44g40.88g
    H2O     


    Комментарии.

    Общие.

  • Чувствительность: ~30x кумасси, <ceребро: ~3-30ng на бэнд.
  • Можно применять для окраски и соли Cu2+, но Zn2+ удобнее и чувствительнее.
  • Метод весьма чувствителен, поэтому:
    1. необходимо работать только в перчатках;
    2. качество воды очень критично, на всех этапах использовать только mQ.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100