Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Работа с белками > Окрашивание гелей Кумасси R250.

Окрашивание белковых гелей Coomassie R250.

Быстрый и простой метод для окраски белковых гелей.

  1. в стеклянный стакан налить краску и поместить в нее гель;
  2. закрыть стакан пленкой и в микроволновке довести до кипения;
  3. качать на качалке 10';
  4. слить краску, сполоснуть гель водой, налить отмывку I;
  5. закрыть стакан пленкой и в микроволновке довести до кипения;
  6. качать на качалке 10';
  7. слить отмывку I, сполоснуть гель водой, налить отмывку II;
  8. закрыть стакан пленкой и в микроволновке довести до кипения;
  9. качать на качалке 10';
  10. слить отмывку II, сполоснуть гель водой;
  11. гель можно сфотографировать, отсканировать или высушить на гель-драере.

    Растворы.

    Краска

    Конц.Сток500ml
    Coomassie Blue R2500.25%тв.1.25g
    Этанол25%100%125ml
    Уксусная кислота25%100%125ml
    H2O50%mQ250ml

    Отмывка

    Конц.Сток1000ml
    Уксусная к-та10%100%100ml
    Этанол10%100%100ml
    H2O80%mQ800ml


    Комментарии.

    Общие.

  • Быстрый и простой метод для окраски белковых гелей. Вся процедура занимает максимум 30 минут. Можно несколько сократить время окрашивания и отмывок и получить результат еще быстрее.
  • По пунктам.

    п. 4,7.

  • Мы обычно используем отмывку "I" по нескольку раз, "II" отмывку - свежую. Когда отмывка "I" становится слишком синей, мы ее выливаем, а использованная и сохраненная отмывка "II", становится отмывкой "I".
  • п. 11.

  • Если гели сушить на фильтровалке, то их потом не очень удобно переводить в цифровое изображение. Фильтровалка не идеально белая и на сером фоне скрадываются плохо видимые полоски. Поэтому, мы обычно фотографируем гели камерой Nikon Coolpix 4500 в проходящем белом свете (на вайт-боксе) для хорошей электронной копии, а для вклеивания в журнал сушим на гель-драере. Если есть приличный сканер (с нормальным значением OD), то можно положить гель прямо на стекло сканера, отсканировать, а затем протереть стекло.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100