Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > РНК > Выделение РНК c тризолом.

Выделение РНК c тризолом.

Быстрый и удобный метод для выделения РНК. Выделенную РНК можно использовать для нозернов, RT-PCR, очистки polyA+ RNA.

  1. гомогенизировать образец ткани в 1ml тризола;
  2. инкубировать на термошейкере 65oС, 5';
  3. ЦФ, максимальные обороты, 10';
  4. инкубировать на термошейкере 65oС, 10';
  5. добавить 200µl хлороформа;
  6. плавно перемешивать, 5';
  7. ЦФ, максимальные обороты, 10';
  8. перенести водную фазу в новую пробирку;
  9. добавить 1/10V 3M AcNa pH5.2, перемешать;
  10. добавить равный объем PrOH, перемешать;
  11. -20oС, 10' или больше;
  12. ЦФ, 6000rpm, 5';
  13. осадок промыть 70% EtOH, подсушить, растворить в воде или 1xTE.

    Растворы.

    Тризол

     Trizol Reagent ( Invitrogen, #15596018, #15596026)


    Комментарии.

    Общие.

  • Быстрый и удобный метод для выделения РНК.
  • По пунктам.

    п. 1.

  • Объем образца ткани не должен превышать 10% от объема фенола (примерно 50-100mg на 1ml тризола). Чем меньше ткани по отношению к тризолу, тем меньше будет примесь геномной ДНК. При большом количестве ткани следует соответственно увеличивать объем тризола. Гомогенизировать можно двумя способами. Если объем образца большой, то удобно залить образец тризолом, в керамической ступке заморозить жидким азотом и растереть пестиком. Если объем образца маленький, то можно гомогенизировать пластиковым пестиком в Эппендорфе. Если нужно одновременно выделить несколько образцов, то удобно гомогенизировать по одному, морозить в азоте и хранить на -20oС, пока не будут гомогенизированы все образцы. Далее их можно выделять параллельно.
  • п. 5.

  • Должно произойти разделение фаз.
  • п. 11.

  • Можно поставить осаждение на ночь.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100