Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Геномная ДНК > Выделение из хвостов мышей.

Выделение геномной ДНК из хвостов мышей.

Простой и удобный метод для выделения геномной ДНК из хвостов мышей.

  1. Отрезать 0.5-1см хвоста, поместить в пробирку;
  2. Добавить 500µl лизис буфера и 5µl протеиназы К (20mg/ml);
  3. Поставить на термошейкер. 55оС, пока хвосты не растворятся;
  4. Добавить 250µl NaCl (5M), перемешать;
  5. Открутить 13000rpm, 10';
  6. Супер перенести в новую пробирку, добавить 750µl EtOH;
  7. Качая пробирку, дождаться образования "медузки";
  8. Отмыть "медузку" 70% EtOH;
  9. Подсушить, растворить в 200µl H2O или 1xTE.

    Растворы.

    Лизис буфер

    Конц.Сток10ml100ml
    Tris-HCl pH8.050mM1M0.5ml5ml
    NaCl200mM5M0.4ml4ml
    EDTA100mM0.5M2ml20ml
    SDS1%10%1ml10ml
    H2O mQ6.1ml61ml


    Комментарии.

    Общие.

  • Простой и удобный метод для выделения геномной ДНК из хвостов мышей. Выделенную ДНК можно использовать для PCR. Если требования к чистоте ДНК более высокие, то ее можно почистить фенолом.
  • По пунктам.

    п. 1.

  • Хвост на мелкие кусочки резать не надо. Целый хвост растворяется быстрее.
  • п. 3.

  • Хвосты должны раствориться полностью. Останутся только волосы. Обычно этот этап занимает около 3 часов. Удобно лизис ставить на ночь и продолжать на следующий день.
  • п. 4.

  • Должен образоваться хорошо заметный осадок.
  • п. 5.

  • Если плавает много мусора можно перенести супер в чистую пробирку и еще раз открутить.
  • п. 8.

  • Отмывка медузки: сэмплером отобрать жидкость из пробирки. Аккуратно! Не захватив медузку. Добавить 0.5-1ml 70%EtOH. Отмыть 1-3 раза. В самом конце тщательно удалить жидкость. Можно открутить на небольших оборотах.
  • п. 9.

  • Можно оставить растворяться на ночь на столе. С утра дорастворить пипетированием.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100