Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Геномная ДНК > Выделение из мух (c DEPC).

Выделение DNA из мух c DEPC.

Быстрый и удобный способ, DNA вполне годится для Southern анализа или PCR.

  1. 100-150 мух поместить в 1.7ml пробирку;
  2. добавить 500 µl "рабочего раствора", раздавить пестиком;
  3. 70oС, 30';
  4. добавить 116µl AcOK (5M);
  5. 0oС 30';
  6. ЦФ 0oС, 5';
  7. супер перенести в новую пробирку с 350µl изопропанола;
  8. NT, 5', осадить;
  9. промыть 70% EtOH;
  10. растворить в H2O (TE) из расчета 1µl на муху.

    Растворы.

    Сток А

    (хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml100ml
    Tris Cl, pH 9.00.1M1M5.0ml10.0ml
    EDTA0.1M0.5M10.0ml20.0ml
    H2O mQ35.0ml70.0ml

    Рабочий раствор

    (свежеприготовленный):

    Конц.Сток2ml3ml10ml
    A0.9x1.0x1.8ml2.7ml9.0ml
    SDS1%10%0.2ml0.3ml1.0ml
    DEPC1%100%20µl30µl0.1ml


    Комментарии.

    Общие.

  • Содержание DNA в мухах: самец ~ 0.75µg, самка ~ 1µg.
  • По пунктам.

    п. 2.

  • Лучше делать это в охлажденной до 0oС пробирке. При этом SDS выпадает в осадок и его кристаллы помогают как следует растереть мух.
  • п. 3.

  • Лизис, модификация белков DEPC.
  • п.5.

  • Ионы К+ с SDS осаждают белки.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100