Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Олигонуклеотиды > Приготовление адаптеров.

Отжиг адаптеров.


    Готовить не слишком много!

  1. приготовить смесь: по 20pmol/ µl каждого из праймеров в 1х буфере для отжига;
  2. в 300ml стакане: 95oС, 5';
  3. дать стакану медленно (~30'-1h) остыть до NT;
  4. перенести в холодильник/холодную комнату, дать остыть до ~4-8oС (~2h);
  5. разаликвотить охлажденным типом в заранее охлажденные пробирки;
  6. хранить в небольших аликвотах при -20oС.

    Растворы.

    Буфер для отжига 10х

    (хранить при -200С долговременно, при +40C в течение дня).

    Конц.Сток1ml
    TrisCl(pH377.5*)0.2M1M0.2ml
    MgCl20.1M1M0.1ml
    NaCl0.5M5M0.1ml
    H2O mQ0.6ml

    * pH 7.5 при 370C (то же, что и рН 7.8 при 250С)



      Комментарии.

      Общие.

    • При использовании следить, чтобы температура раствора адаптера не поднималась выше ~10оС: оттаивать во льду, вносить в заранее охлажденную лигазную смесь в холодной комнате охлажденным типом.

    "Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
    e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


    Rambler's Top100