Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Разное > Процент включения.

Определение процента включения.

Преципитацию 10% ТХУ можно использовать для определения процента включения практически для любого вида мечения (для олигонуклеотидов от 10b).

    Преципитация 10% ТХУ.

    Устройство для промывки GFC-фильтриков
  1. перенести совсем небольшое количество материала реакции на маленький (~3х3mm2) GFC-фильтрик (только обмакнуть желтый типчик и перенести на фильтр то, что задержалось на стенках типа);
  2. просчитать на ручном счетчике (лучше подобрать такое положение счетчика, чтобы стрелка отклонялась на полную шкалу);
  3. поместить фильтрик на вакуумную промывалку и промыть ~0.5ml 10%ТХУ;
  4. просчитать на ручном счетчике (положение счетчика как в п.2).
  5. Непроверенная информация Хроматография (для большого числа образцов).

  6. нанести 0.5-1.0µl образца на Whatman 3MM бумагу, подсушить;
  7. 20' хроматография в
  8. 3.5M (NH4)2SO4
    75mM NaPO4(pH 6.8)
    2% n-propanol;

  9. свободные нуклеотиды оказываются в верхней части бумаги. Олигонуклеотиды (>5b) и длинная DNA остаются в местах нанесения.


    Комментарии.

    По пунктам.

    п. 3.

  • 10% ТХУ преципитирует длинные молекулы DNA на стеклянном фильтре, но оставляет в растворе dNTP.
  • Непроверенная информация Вместо 10% ТХУ можно использовать (1M HCl, 0.1M Sodium pyrophosphate).
  • п. 6.

  • Другой тип хроматографии: на Hybond-N+, хромотография в (1.5N NaCl, 0.4N NaOH).

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100