Практическая Молекулярная Биология - главная страница.
 > Методы > Двугибридная система > Растворы, среды, антибиотики, добавки.

Растворы, среды, антибиотики, добавки для двугибридной системы.

Растворы, среды, антибиотики, добавки используемые для двугибридного скрининга на основе "MATCHMAKER GAL4 Two-Hybrid System 2" от Clontech.


    Растворы.

    "LiAc"

    Конц.Сток50ml100ml200ml
    LiAc  2H2O
    (Sigma L-6883)
    1M102 g/M5,1g10,2g20,4g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 200mlдо 

    "TE 10x"

    Конц.Сток50ml100ml
    TrisCl pH 7.60.1M1M5ml10ml
    EDTA10mM0.5M1ml2ml
    H2O mQ44ml88ml

    "TE/LiAc"

    Конц.Сток5ml10ml20ml
    TE1x10x0.5ml1ml2ml
    LiAc0.1M1M0.5ml1ml2ml
    H2O mQ4ml8ml16ml

    "PEG 50%"

    Конц.Сток50ml100ml200ml
    PEG 400050%тв.25g50g100g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 200mlдо 

    "PEG/LiAc"

    Конц.Сток10ml60ml100ml
    PEG 400040%50%8ml48ml80ml
    TE1x10x1ml6ml10ml
    LiAc0.1M1M1ml6ml10ml

    "Геномная ДНК"

     Clontech рекомендует использовать Herring testes carrier DNA 10mg/ml (#K1606-A).
     Мы используем лиофилизованную ДНК из спермы лосося. Лиофилизованную ДНК растворить, озвучить. При желании получить более чистую ДНК, ее можно отфенолить. Растворить в 1xTE. Довести концентрацию до 10mg/ml.

    Антибиотики.

    "Canavanine"

     Сток (4000x):20mg/ml
     Рабочая концентрация:5µg/ml

    "Cycloheximide"

     Сток:1mg/ml
     Рабочая концентрация:1µg/ml


    Рабочие концентрации антибиотиков варьируются в зависимости от линии дрожжей. Например для линии CG1945 необходима концентрация циклогексимида 1µg/ml, а для Y190 10µg/ml.


    Среды.

    "YPD среда"

    Конц.Сток100ml200ml1L
    Бакто-пептон2%тв.2g4g20g
    Бакто-дрож. экст.1%тв.1g2g10g
    Бакто-агар1.8%тв.1.8g3.6g18g
    Глюкоза2%40%5ml10ml50ml
    H2O mQ95ml100ml950ml
       Смешать все, кроме глюкозы. Автоклавировать. Затем добавить стерильную глюкозу.
       Если нужна жидкая среда, агар не добавлять.

    "SD среда"

    Конц.Сток100ml200ml1L
    Difco yeast nitrogen base
    w/o amino acids
    0.7%тв.0.7g1.4g7g
    Бакто-агар2%тв.2g4g20g
    Глюкоза2%40%5ml10ml50ml
    H2O mQ95ml100ml950ml
       Смешать все, кроме глюкозы. Автоклавировать. Затем добавить стерильную глюкозу и необходимые аминокислоты.
       Аминокислоты можно добавлять и перед автоклавированием.
       Если нужна жидкая среда, агар не добавлять.
       SD-leu-trp-his - это среда SD с добавлением всех аминокислот кроме лейцина, триптофана, гистидина. Аналогично, SD-leu-trp, SD-leu-his, SD-trp-his - это среды SD с добавлением всех аминокислот кроме указанных.

    Аминокислоты.

    "Аденин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    Adenine (Sigma A-9126)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Аргинин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Arginine (Sigma A-5131)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Валин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Valine (Sigma V-0500)150g/Lтв.7.5g15g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 1500mg/L.

    "Гистидин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Histidine (Sigma H-8125)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Изолейцин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Isoleucine (Sigma I-2752)30g/Lтв.1.5g3g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 300mg/L.

    "Лейцин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Leucine (Sigma L-8000)100g/Lтв.5g10g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 1000mg/L.

    "Лизин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Lysine (Sigma L-5626)30g/Lтв.1.5g3g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 300mg/L.

    "Метионин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Methionine (Sigma M-9625)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Треонин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Threonine (Sigma M-8625)200g/Lтв.10g20g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 2000mg/L.

    "Триптофан 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Tryptophan (Sigma T-0254)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Тирозин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Tyrosine (Sigma T-3754)30g/Lтв.1.5g3g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 300mg/L.

    "Урацил 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    Uracil (Sigma U-0750)20g/Lтв.1g2g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 200mg/L.

    "Фенилаланин 100x"

    Конц.Сток50ml100ml
    L-Phenylalanine (Sigma P-2126)50g/Lтв.2.5g5g
    H2O mQдо 50mlдо 100mlдо 
       Рабочая концентрация - 500mg/L.

    Добавки.

    "3-AT"

       3-amino-1,2,4-triazole. Sigma A-8056. Fw - 84,08. Рабочая концентрация 1-60mM, в зависимости от линии дрожжей.
       3-AT это ингибитор HIS3 гена. Используется для подавления фонового роста дрожжей на среде, не содержащей гистидин.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru


Rambler's Top100